Способность предугадывать опасность, будь то землетрясение, наводнение или просто вышедший на охоту хищник, присуща всем без исключения представителям животного мира, хотя и в разной степени. Хотя человечеству пока неизвестно, по каким именно признакам многие звери и птицы предчувствуют землетрясение, нет сомнений в том, что, раз появившись, это и подобные умения быстро распространились среди всех представителей вида.
С другой стороны, чувство опасности и страха – это всего лишь чувство. Одного сигнала, например, силуэта хищника или дрожания земли, мало для реакции, необходимо еще и соответствующим образом этот сигнал интерпретировать.
Ключевое связующее звено здесь – ген статмин, продукты экспрессии которого непосредственно участвуют в работе мозга.
или миндалина (Corpus amygdaloideum) - область мозга, по одной копии которого расположены внутри каждой височной доли (Lobus temporalis) мозга. Миндалина играет ключевую роль в формировании эмоций, является частью лимбической системы. У людей и у других животных эта подкорковая мозговая структура участвует в формировании как отрицательных, так и положительных эмоций. Размер миндалины положительно коррелирует с агрессивным поведением.
У людей это самая сексуально-диморфная структура мозга - у мужчин после кастрации она сжимается более чем на 30 %. Предполагается, что такие состояния, как беспокойство, аутизм, депрессия, пост-травматический шок и фобии, связаны с ненормальным функционированием миндалины.
Миндалина - это фактически несколько отдельно функционирующих ядер, которые анатомисты объединяют вместе за счт близости ядер друг к другу. Среди этих ядер ключевыми являются: базально-латеральный комплекс, центрально-медиальные ядра и корково-медиальные ядра.
Глеб Шумяцкий и его коллеги из Университета Рутгерса обнаружили связь этого гена с поведением еще два года назад, но детально исследовать его роль им удалось только сейчас. Объект для исследований был выбран неслучайно: белок статмин, являющийся продуктом одноимённого гена, в высокой концентрации встречается в ядрах миндалевидного тела, а именно этот участок мозга у человека и животных отвечает за социальное взаимодействие и другие виды поведения.
Нокаутные мыши и Нобелевская премия
Метод нокаута генов позволяет получать линии нокаутных мышей (knock-out mice, knockout mice) — мутантных мышей, у которых выключены определенные гены. Этот метод позволяет исследовать роль каждого конкретного гена в развитии организма и в его нормальной и патологической работе и изучать различные человеческие болезни, используя мышей в качестве модельных объектов. Выключенный ген приводит к тем или иным нарушениям. Характер этих нарушений позволяет судить о функциях данного гена. С тех пор как эта методика была разработана, ее применение позволило создать тысячи различных линий нокаутных мышей, из которых несколько сотен служат модельными объектами для изучения человеческих болезней, в частности заболеваний сердечно-сосудистой и нервной систем и злокачественных опухолей.
В основе метода лежит явление гомологичной рекомбинации — обмена соответствующими участками между парами гомологичных хромосом. Марио Капекки и Оливер Смитис независимо друг от друга изобрели способ выключения (нокаутирования) генов за счет гомологичной рекомбинации с участием искусственно синтезированных фрагментов ДНК, имеющих определенную последовательность нуклеотидов, соответствующую участку одного из генов, но некоторым образом видоизмененную. Такие фрагменты вводят в выращиваемые в культуре (то есть в искусственной среде отдельно от организма) клетки посредством электропорации — через поры в клеточной мембране, созданные искусственно с помощью электрического поля. За счет рекомбинации в некоторых из клеток культуры введенная последовательность внедряется в хромосому на место нормальной.
Если видоизменить внедряемую последовательность определенным образом, то на основе испорченного таким образом гена у получивших этот ген клеток будет синтезироваться нефункциональный (не выполняющий своей функции) белок, или вообще не будет синтезироваться никакого белка. Если видоизменить исходную последовательность, не только испортив некоторый ген, но и добавив другой ген, не свойственный мышиным клеткам и делающий их устойчивыми к действию некоторого антибиотика, рекомбинантные клетки можно легко отделить от остальных, подействовав на культуру данным антибиотиком, и получить таким образом культуру рекомбинантных клеток. Капекки и Смитис научились выключать с помощью этого метода гены в культурах клеток, но разработанная ими технология еще не позволяла получать нокаутные многоклеточные организмы.
Мартин Эванс, который около 1980 года одним из первых разработал способ выращивания в культуре эмбриональных стволовых (недифференцированных) клеток мышей, впоследствии изобрел метод, позволяющий передавать определенные гены потомству мышей, этими генами не обладающих. Он вводил стволовые клетки, полученные из эмбрионов мышей одной линии, в эмбрионы мышей другой линии и, используя какую-либо мышь в качестве суррогатной матери, вынашивающей эти эмбрионы, получал химерных мышей (состоящих из клеток, полученных от разных организмов). У некоторых из них предшественники гамет (половых клеток) были потомками инъецированных в эмбрионы стволовых клеток. Потомству таких химер доставались гены той линии, от которой были взяты стволовые клетки. Отбирая потомков химер, обладающих признаками этой линии, Эванс получил мышей, генетически идентичных инъецированным ранее в эмбрионы стволовым клеткам.
Затем Эванс модифицировал этот метод для получения трансгенных мышей (то есть мышей с искусственно внедренными генами), добавляя гены в хромосомы инъецируемых стволовых клеток c помощью ретровирусов (вирусов, гены которых встраиваются в хромосомы клеток хозяина). Потомки химер, полученных таким способом, если у этих химер предшественники половых клеток образовывались из инъецированных в эмбрион стволовых клеток, оказывались носителями внедренного в стволовые клетки гена.
Достижения Эванса сделали возможным создание мышей, у которых определенный ген был бы выключен посредством нокаутирования за счет гомологичной рекомбинации с участием искусственно синтезированных фрагментов ДНК, то есть объединив метод Эванса с методом Капекки и Смитиса — нокаутируя гены в инъецируемых в эмбрион стволовых клетках. Именно в лабораториях Капекки и Смитиса (снова независимо, и в разных вариантах) подобный модифицированный метод и был впервые применен на практике, положив начало множеству работ с нокаутными мышами.
Схема получения нокаутных мышей. В эмбриональные стволовые клетки мышей некоторой чистой (то есть генетически однородной) линии (в данном случае — черного цвета) вводят фрагмент ДНК, содержащий мутантный (поврежденный) ген. Этот фрагмент встраивается в хромосомы — нередко только в одну из двух гомологичных хромосом клетки. Полученные мутантные стволовые клетки вводят в зародыши мышей другой линии (в данном случае — бурых) на ранней стадии развития и имплантируют эти зародыши в организм суррогатной матери. Рождаются химерные мыши, некоторые из которых (те, у кого предшественники половых клеток развились из инъецированных стволовых клеток) производят исключительно черное потомство. Если у каждой из таких мышей мутантный ген имеется в одной из двух гомологичных хромосом, то, в соответствии с менделевским расщеплением, приблизительно половину их потомства составят носители мутантного гена, а четверть — гомозиготы, имеющие мутантный ген в обеих хромосомах пары и, соответственно, не имеющие ни одной копии нормального (неповрежденного) гена. Потомство таких гомозигот будет чистой линией мышей, нокаутных по данному гену.
Применение метода нокаута генов стало особенно актуальным в последние годы, после завершения секвенирования (прочтения последовательности) полных геномов как человека (2003), так и мыши (2002), а также ряда других видов животных. Последовательно нокаутируя различные гены в пределах мышиного генома, исследователи выясняют функции каждого из них. Учитывая, что у человека и мыши очень многие гены сходны и выполняют одни и те же функции, нокаутные мыши предоставляют исследователям богатый материал для изучения роли генов в нормальном развитии и жизни человеческого организма и в патологических процессах. По-видимому, рано или поздно благодаря методу нокаута генов удастся изучить свойства всех (нескольких десятков тысяч) генов мышиного генома. Работы в этом направлении ведутся во многих странах мира, не исключая и Россию.
Метод нокаута генов можно применять не только на мышах, но и на других животных. Однако именно нокаутные мыши нашли особенно широкое применение — в связи с тем, что они эволюционно (и, соответственно, генетически) довольно близки к человеку, а получить нокаутные линии у них намного проще, чем у большинства других лабораторных животных. В частности, у крыс первые нокаутные линии были получены только в 2003 году, через много лет после создания первых нокаутных мышей.
Выяснить точную роль этого гена помогла «нобелевская» работа Марио Капекки – ученые из Джерси вывели линию мышей, «нокаутных» по гену stathmin, то есть не производящих соответствующих белков. Поскольку развитие происходило в лабораторных вольерах, начисто лишенных опасных объектов, то подопечным удалось даже дожить до детородного возраста.
А потом началось самое интересное: обычные мамы на фоне «дефектных» выглядели настоящими наседками.
Как только ученые растаскивали детенышей из гнезда, обычные мамы сразу же отправлялись на поиски и немедленно возвращали своих чад домой. «Нокаутных» по гену статмина родительниц судьба отпрысков мало интересовала. Какой-то заботы удалось добиться, только «напомнив мамам об их долге»: ученые на несколько минут возвращали детей в дом и потом снова «прятали».
Предвосхищая логичные вопросы о том, что это обусловлено именно родительской заботой, а не потерей обоняния или памяти, Шумяцкий провел еще несколько экспериментов. «Дефектные» мыши не хуже обычных находили спрятанные объекты по запаху, так же, как и распознавали и запоминали неизвестные силуэты и формы.
Зато они оказались куда более открытыми и беззаботными.
Грызуны без статмина пытались знакомиться со всеми помещенными в их клетку собратьями безо всякого стеснения или опаски. Но этот феномен отсутствия «гена страха» был продемонстрирован и в предыдущих работах Шумяцкого.
Запахи, реакция на которые является врожднной, воспринимаются рецепторами, расположенными на задней стороне носовой полости. А выучить в течение жизни, какой запах является хорошим, а какой – плохим, можно с помощью рецепторов передней е части.
Вы не задумывались, почему мы одни запахи с самого детства считаем неприятными, а другие – наоборот, даже если источник этих запахов никогда нам не встречался? Тот же самый врожденный механизм отвечает за запахи «страха и опасности», побуждающие мышей бежать и прятаться при одном только появлении молекул мочи снежного барса.
Хотя механизм до недавнего времени оставался не ясен, эволюционное происхождение подобной системы врожденной защиты понятно, ведь такие безусловные рефлексы существенно повышают шансы маленьких грызунов на выживание в мире с огромным числом хищников.
Обонятельная система всех млекопитающих, хотя и различается по чувствительности, вс-таки имеет схожее строение. Сверхвосприимчивые обонятельные нейроны, способные реагировать даже на отдельные молекулы веществ, располагаются в обонятельном эпителии носовой полости. Причем гистологи уже давно выделили два основных типа обонятельных нейронов: дорсальные нейроны, располагающиеся на спинной стороне полости, и вентральные, расположенные на грудной стороне, отличаются по строению. Однако разницы в выполняемых ими функциях до сегодняшнего дня выявлено не было.
Нервные проводящие пути обонятельных нейронов заканчиваются в обонятельных луковицах головного мозга – образованиях, давших в свое время начало высокоразвитому мозгу первых наземных позвоночных. При этом расположение получающих и обрабатывающих информацию в мозге нейронов соответствует схеме расположения чувствительных нейронов в носовой полости.
Чтобы определить, какие нейроны за что отвечают, Хитоси Сакано из Университета Токио и его коллеги вывели линию мышей без обонятельных нейронов в эпителии задней (дорсальной) стороны. А затем
проанализировали их поведение на различные «хорошие» и «плохие» запахи. Обычные мыши стремились к источнику запахов орехового масла и мышиной мочи, но не переносили молекул разлагающейся пищи, секрета желез лисы и мочи ирбисов.
Новая линия мышей без дорсально расположенных нейронов практически не проявляла интереса к приятным запахам, так же как и к устрашающим
Можно было бы предположить, что молекулы этих «неприятных» запахов имеют что-то общее в строении и могут улавливаться только отсутствующими дорсальными клетками. Но ученые доказали, что мыши были способны распознавать эти запахи и даже вырабатывать условный рефлекс при встрече с лисой, приводящий к последующей негативной реакции уже без подкрепления самим источником.
Видимо, дорсальные нейроны отвечают за восприятие и передачу запахов, врожденно ассоциируемых со страхом, тогда как вентральные – за появляющиеся в течение жизни.
На новой линии мышей показано не только различия в механизмах регистрации запахов нейронами носовой полости, но и в реакции на них головного мозга. У нормальных мышей вдыхание выделяемого железами лисы триметилтиазолина приводило к образованию адренокортикотропного гормона (АКТГ) – изученного стимулятора стрессовой реакции, запускающейся в опасных для организма условиях. Тогда как у мутантных мышей выброса АКТГ в кровь показано не было.
По мнению Сакано, механизм регистрации запахов у людей принципиально схож. Но в отличие от животных, человек обладает способностью подавлять врожденные, безусловные рефлексы. Японский учный пояснил это на примере распространенной в Токио закуски – ферментированных бобов сои, обладающих крайне неприятным запахом: «Этот запах говорит, что продукт опасен, и есть его не стоит, но благодаря возможности подавлять рефлексы обучением, некоторые действительно становятся любителями этой вещи».
Нет сомнения, что подобные примеры могут привести и жители других стран.
Своим основным достижением ученые считают именно обнаруженную связь с «чувством материнской заботы и долга». Ведь если отсутствие индивидуального страха – хотя и важный фактор естественного отбора, но компенсируемый источниками пищи, недоступными трусам, то без материнского долга судьба детенышей и всего вида находится в смертельной опасности.
Шумяцкий нашел своему открытию и практическое применение. Насчет солдат «без страха и упрека» в публикации в Proceedings of The National Academy of Sciences ученый умолчал, а вот в психиатрии, где повреждения или нарушения работы миндалевидного тела чреваты гневом и депрессией, ему найдется применение.